Конструирование мультиплексной ПЦР для идентификации токсигенных штаммов генетических вариантов Vibrio cholerae эльтор и их дифференциации по эпидемическому потенциалу

Автор: Н.А. Плеханов, С.П. Заднова, Д.А. Агафонов, Н.И. Смирнова

Страница: 82-90

Конструирование мультиплексной ПЦР для идентификации токсигенных штаммов генетических вариантов Vibrio cholerae эльтор и их дифференциации по эпидемическому потенциалу

Биотехнология, 2015, № 2, С. 82-90

УДК 616.932:579.25

Раздел:  «Метрология, стандартизация, контроль»

Н.А. Плеханов ^*,  С.П. Заднова,  Д.А. Агафонов,  Н.И. Смирнова

ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт “Микроб”»,  Саратов, 410005

e-mail:  rusrapi@microbe.ru

Разработан способ выявления токсигенных штаммов геновариантов V. cholerae О1 серогруппы биовара эльтор и их дифференциации на штаммы с высоким и низким эпидемическим потенциалом. С этой целью определяли структуру острова пандемичности VSP-II методом мультиплексной ПЦР, которую проводили в один прием в двух реакционных смесях. Для токсигенных штаммов геновариантов V. cholerae О1 биовара эльтор с интактным островом пандемичности VSP-II и низким эпидемическим потенциалом характерно наличие ампликонов генов rfbO1, rstC, ctxA, ctxВ^Сlass, vc0502 и vc0514; у токсигенных геновариантов V. cholerae О1 биовара эльтор, обладающих высоким эпидемическим потенциалом и имеющих VSP-II c протяженной делецией, определяются ампликоны фрагментов генов rfbO1, rstC, ctxA, ctxВ^Сlass и vc0514. Высокая специфичность мультиплексной ПЦР подтверждена при тестировании близкородственных видов вибрионов, а также энтеробактерий. С помощью разработанной мультиплексной ПЦР проведено исследование 52 коллекционных штаммов V. cholerae и выявлено 8 токсигенных штаммов геновариантов V. cholerae О1 биовара эльтор, завезенных в Российскую Федерацию в 2004—2012 г. и обладающих высоким эпидемическим потенциалом. Сконструированная мультиплексная ПЦР может быть использована при проведении эпидемиологических расследований и получении полной характеристики завезенных штаммов V. cholerae, а также при паспортизации штаммов холерного вибриона, хранящихся в Государственной коллекции патогенных бактерий ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб».

Ключевые слова:  генетически измененные штаммы,  мультиплексная ПЦР,  эпидемический потенциал,  Vibrio cholerae.

Полная версия данной статьи находится на сайте Российской научной электронной библиотеки по адресу:  http://elibrary.ru/item.asp?id=23746044

14.09.2015, 3934 просмотра.