Экспрессия в трансгенных растениях табака гена пептида М2е вируса гриппа птиц H5N1 в трансляционном слиянии с субъединицей Б рицина

Автор: А.П. Фирсов, И.В. Тарасенко, А.С. Пушин, Л.А. Шалойко, Л.М. Винокуров, С.В. Долгов

Страница: 55-64

Экспрессия в трансгенных растениях табака гена пептида М2е вируса гриппа птиц H5N1 в трансляционном слиянии с субъединицей Б рицина

Биотехнология, 2015, № 2, С. 55-64

УДК 575.113.1:577.218:633.71]:615.371

Раздел:  «Продуценты, биология, селекция, генетическая инженерия»

А.П. Фирсов ^*,  И.В. Тарасенко ^*,  А.С. Пушин,  Л.А. Шалойко,  Л.М. Винокуров,  С.В. Долгов

Филиал Института биоорганической химии имени М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Пущино,  Московская область, 142290

e-mail:  aleksey_firsov@mail.ru,  starassenko@rambler.ru

Пептид М2е вируса гриппа птиц H5N1 Curgan 2005 был успешно экспрессирован в трансгенных растениях табака. Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминотерминальный участок белка М2 длиной 30 а.о., включающий пептид М2е (М130), была трансляционно слита в рамке считывания с 3'-концом нуклеотидной последовательности субъединицы В рицина в векторе pBI121. Полученной конструкцией были успешно трансформированы растения табака. С помощью асиалофетуин-иммобилизованного ИФА показано присутствие субъединицы В рицина (RTB) в четырех линиях трансгенных растений из восьми изученных. Присутствие пептида М2е в составе слитого белка RTB-М130 было подтверждено в двух линиях трансгенных растений, в двух других линиях несмотря на присутствие RTB пептид М2е не детектировался. Методом количественного ИФА с иммобилизованным асиалофетуином показано, что накопление слитого белка RTB-M130 составило в этих линиях 3,3 и 2,4 мкг/г сырой массы листьев (0,02% и 0,01%  от общего растворимого белка, соответственно). В линиях, где детектировалась экспрессия только гена RTB, его накопление было равно 2,1 и 2,4 мкг/г сырой массы (0,01 и 0,02% от общего растворимого белка, соответственно). Методом вестерн-блот-анализа показано, что ген белка RTB-M130 экспрессировался в растениях табака как димер без заметных признаков деградации. Полученные результаты будут в дальнейшем использованы для разработки на основе трансгенных растений съедобной вакцины против гриппа птиц.

Ключевые слова:  биофарминг,  грипп птиц,  пептид М2е,  субъединица Б рицина,  съедобные вакцины.

Полная версия данной статьи находится на сайте Российской научной электронной библиотеки по адресу:  http://elibrary.ru/item.asp?id=23746041

14.09.2015, 4343 просмотра.