Оптимизация процесса рефолдинга рекомбинантного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека, иммобилизованного на аффинном сорбенте

Автор: Е.Н. Кособокова, К.А. Скрыпник, М.В. Пинюгина, А.И. Щербаков, В.С. Косоруков

Страница: 39-46

Оптимизация процесса рефолдинга рекомбинантного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека, иммобилизованного на аффинном сорбенте

Биотехнология, 2013, № 3, С. 39-46

УДК 57.088.2

Раздел:  «Технология биопрепаратов»

Е.Н. Кособокова ^*,  К.А. Скрыпник,  М.В. Пинюгина,  А.И. Щербаков,  В.С. Косоруков

ФГБУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН, Москва, 115478

e-mail:  ekkos@mail.ru

Оптимизация процесса рефолдинга рекомбинантного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека, иммобилизованного на аффинном сорбенте

Описана система получения и очистки биологически активного рекомбинантного  гранулоцитарно-макрофагального фактора человека (рчГМ-КСФ), синтезированного в результате экспрессии в клетках Escherichia coli. Особенностями предложенной методики является предварительная очистка (отмывка) фракции телец включения, позволяющая избавиться от ряда балластных белков, а также проведение рефолдинга на колонке аффинного сорбента. Эффективность рефолдинга достигала 70%; чистота полученного препарата составляла 95%. Очищенный и рефолдированный рчГМ-КСФ обладал биологической активностью, характерной для других рекомбинантных аналогов.

Ключевые слова:  ГМ-КСФ,  рефолдинг на колонке,  His-домен.

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Optimization of Refolding of Recombinant Human Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor (rhGM-CSF) Immobilized on Affinity Sorbent

E.N. Kosobokova ^*,  K.A. Skrypnik,  M.V. Pinugina,  A.I. Shcherbakov,  and  V.S. Kosorukov

The Blokhin Russian Oncological Research Center, Russ. Acad. Med. Sci., 115478, Moscow Russia

e-mail:  ekkos@mail.ru

A method for obtaining and purification of biologically active recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (rhGM-CSF) synthesized as a result of the expression in Escherichia coli cells has been developed. A pre-washing of inclusion bodies fraction which allows to remove numerous ballast proteins, and on-column refolding of rhGM-CSF are specific characteristics of the method. The refolding effeciency reached 70%, wereas the target preparation purity was 95%. The biological activity of the purified and refolded protein was similar to those of other recombinant hGM-CSF analogues.

Key words:  GM-CSF,  His-tag,  on-column refolding.

06.09.2013, 3630 просмотров.